Gelfiltrering
Snabb separation av stora och små molekyler

Teori: Sephadexkornen innehåller ett fint nätverk av sammankopplade molekyler. Små partiklar kan tränga in i de små håligheterna och får alltså gå längre väg än stora partiklar som endast  kan passera mellan kornen. Se vidstående skiss. På detta sätt kan man separera partiklar med olika storlek.

Material:
Färdigpackad kolonn med Sephadex G-25
Pipett
Provrör
Liten bägare
Provlösning: Lösning av blå dextran och kaliumkromat i 0.9% Na Cl
Elueringsvätska: 0.9% NaCl

Utförande:
·        Tag av övre proppen  på kolonnen och fyll den med elueringsvätska
·        Placera kolonnen över en bägare och ta av den nedre proppen. Vätskan rinner nu ut men flödet stoppar
      automatiskt när vätskenivån kommit ner till filtret som täcker gelen.
      OBS! Kolonnen kan alltså aldrig gå torr!
·        Tillsätt 0,5 ml provlösning.
·        När vätskan trängt in i gelen fylls kolonnen med elueringsvätska, först 0,5 ml som får rinna ner, sedan
      fylls hela kolonnen ända upp.
·        Det blå dextranet rinner snabbt igenom kolonnen. Samla upp det i ett provrör.
·        Fyll på mer elueringsvätska i kolonnen och samla upp det gula kromatet i ett nytt provrör.

Kolonnen är nu färdig att användas på nytt.
Resultat

Förvaring: Fyll kolonnen med elueringsvätska och sätt på propparna. Vid långvarig förvaring bör ett bakteriehämmande medel tillsättas.

 Mer om kolonn-kromatografi på vår hemsida http://home.swipnet.se/biokomp/startsid.htm