© Biokomp i Göteborg AB |
Gelgjutning
Gjutning av gel till submarin gelelektrofores
Kemikalier
Agaros för separation av nukleinsyra
TBE-buffert: stamlösning (27g Tris+13,5g borsyra+2,3g EDTA i 1 l vatten)
späds 10 ggr före användandeUtförande
Späd stamlösningen av TBE-buffert 10 ggr. Tänk på att göra så mycket att det räcker till gelgjutning och till elektroforeskärlet.
För gelformar utan speciell gjutform: Tejpa gelformens kortsidor med tejp, gärna dokumenttejp. Gör gärna ett litet "öra" att dra i för att underlätta borttagandet av tejpen.
Lägg gelformen på ett absolut vågrätt underlagTag reda på hur stor volym gel som åtgår!.
Kontrollera vilken agaroskoncentration, som är lämlig för de DNA-fragment, som ska separeras på gelen.
Räkna ut hur mycket agars,som åtgårVäg upp beräknad massa agaros i en 200 ml E-kolv.
Tillsätt brukslösning TBE-buffert, markera vätskenivån.
Värm lösningen i mikrovågsugn tills den är alldeles glasklar.
Låt den svalna till ca 60oC, justera ev vätskenivån.
Häll gelen i gelformen till 4-5 mm höjd. Ta bort ev luftblåsor med pasteurpipett.
Sätt omedelbart (innan agarosen stelnat) ner en eller två kammar för provbrunnsformning, .När agarosen stelnat (efter ca 15-20 min), tas tejpen bort och gelformen läggs i elektroforesapparaten.
Ta bort kammen eller kammarna försiktigt.
Elektroforesbuffert hälls på så mycket att den står 1-2 mm över gelytan.