© Biokomp i Göteborg AB

Gelgjutning

 

                Gjutning av gel till submarin gelelektrofores

Kemikalier

 

Agaros för separation av nukleinsyra
TBE-buffert
: stamlösning (27g Tris+13,5g borsyra+2,3g EDTA i 1 l vatten)
späds 10 ggr före användande
Utförande

 

 

 

Späd stamlösningen av TBE-buffert 10 ggr. Tänk på att göra så mycket att det räcker till gelgjutning och till elektroforeskärlet.

För gelformar utan speciell gjutform: Tejpa gelformens kortsidor med tejp, gärna dokumenttejp. Gör gärna ett litet "öra" att dra i för att underlätta borttagandet av tejpen.

Lägg gelformen på ett absolut vågrätt underlag

Tag reda på hur stor volym gel som åtgår!.
Kontrollera vilken agaroskoncentration, som är lämlig för de DNA-fragment, som ska separeras på gelen.
Räkna ut hur mycket agars,som åtgår

Väg upp beräknad massa agaros  i en 200 ml E-kolv.
Tillsätt brukslösning TBE-buffert, markera vätskenivån.
Värm lösningen i mikrovågsugn tills den är alldeles glasklar.
Låt den svalna till ca 60oC, justera ev vätskenivån.
Häll gelen i gelformen till 4-5 mm höjd. Ta bort ev luftblåsor med pasteurpipett.
Sätt omedelbart (innan agarosen stelnat) ner en eller två kammar för provbrunnsformning, .

När agarosen stelnat (efter ca 15-20 min), tas tejpen bort och gelformen läggs i elektroforesapparaten.
Ta bort kammen eller kammarna försiktigt.
Elektroforesbuffert hälls på så mycket att den står 1-2 mm över gelytan.
elektrof.gif (8657 bytes)