Uppdaterad 2002-01-05

Lokalen Du bör ha tillgång till laboratorium som inte används för "smutsig" biologiundervisning, som hantering av jordprover eller material insamlat under fältundersökningar. Detta är viktigt för att inte kvalster och småkryp ska promenera på agarplattorna och avsätta fotspår av bakteriekolonier i odlingarna. Rummet bör vara dragfritt och lättstädat med lätt avtorkningsbara bordsytor och släta väggar. Dammsamlande föremål är bannlysta likaså.  Att helt reservera en lärosal för enbart detta ändamål kan ställa sig dyrbart, men ett grupprum om 20-30 kvm i nära anslutning till ett kemi- eller biologilaboratorium uppfyller lätt kraven för sterilarbete, medan närliggande laboratoriesalar kan användas för moment där sterilitetskraven är mindre stränga. Kostnad Total investeringskostnad för nedanstående inventarier och apparatur, glasvaror och startförråd av förbrukningskemikalier gick för Gripenskolans del på mindre än 100 000:- kronor, men då kunde ledningsdragningar, snickeriarbeten och målning utföras av skolans personal och elever. Var skeptisk mot mina siffror. De kan vara inaktuella och är hämtade ur mitt långtidsminne.   Inredning och Inventarier Avsevärda skåputrymmen krävs för glasvaror och odling i rumstemperatur. Väggmonterade skåp med glasdörrar är lämpligast. Om rummet är trångt är skjutdörrar att föredra Skilj på utrymmen för sterila varor, osterila glasvaror, medier respektive odlingar .  Under skåpen monteras lämpligen "långbänkar" av perstorpsplatta med hurtsar under. Lysrörsbelysning monteras med fördel i nederkanten av skåpen.  Rummet bör delas i en inre "steril zon" och en yttre "snuskig zon". Den yttre zonen bör vara inredd med diskbänk och bänk för vägning och hantering av icke steriliserat material. Diskmaskin underlättar arbetet betydligt, men behöver inte finnas inne i detta laboratorium, utan kan gärna delas med kemiinstitutionen. Manuell diskning med provrörsborste är inte tillräckligt effektivt.  Ett rymligt kylskåp, med frysfack för ömtåliga biokemikalier är nödvändigt. Gärna två mindre kylskåp, men 60 liters volym vardera är ett minimum. Matvaror får inte förvaras i dem, såvida inte varorna är undersökningsobjekt. (Arbetsmiljölagen!).  En värmeugn för torrsterilisering vid 150 oC bör finnas (en bänkspis med ugn duger). Minst 2 stycken inkubatorer i temperaturintervallet 20-70oC behövs. Värmeugnar för torrsterilisering har i regel för låg precision i de lägre temperaturerna för att vara lämpliga som inkubatorer. Inkubatorer finns i olika prisklasser för skilda ändamål. Köper du en med temperaturinställning på plus-minus 0.1 grad inom intervallet 20 -120oC och med slutet system för att kunna odla i anaerob atmosfär med kontrollerad sammansättning, ja då har du troligen förbrukat hela din investeringsbudget på 100 000:- kronor. Alltså måste du söka ett billigare alternativ. En 50-liters inkubator med precision +- 1 grad inom intervallet 20-80 grader duger mer än väl för de flesta skolförsök. Kostnaden är cirka 8 500:- kr, men du behöver minst två stycken.  Termostaterat vattenbad med cirkulation är ett oumbärligt verktyg som ej kan ersättas med inkubator. C:a 3 000:- kronor Skaktermostatbad för odling av vätskekulturer har du nytta av, om du redan har ett. Men för allt i världen, köp inget! Dyrt, skrymmande, mekanism som slits och dessutom väsnas det. Bättre och billigare alternativ finns. Köp hellre en magnetomrörare med plats för 15 stycken 100 ml E-kolvar, apparaten kan även användas till färre, men större kolvar. En bra omrörare från Variomag (säljs av Nino-lab, Upplands-Väsby) är utan rörliga delar och drivs med 12 volts spänning. Apparaten kan ställas in i termostaterat skåp om temperaturen är lägre än 55oC. Kostnaden är ca 9 000:-kr. Det finns även helt inkapslade omrörare, som kan nedsänkas i ett termostatvattenbad, men kostnaden närmar sig då ett skaktermostatbad. Omröraren är i alla fall mer långlivad och strömsnål. I regel behöver du bara ställa på snurr i rumstemperatur. Magnetloppor, teflonbelagda. De kan autoklaveras ihop med vätskemedierna i E-kolvar. Kokplatta är bra att ha i laboratoriet, men inte nödvändig om du har en mikrougn.    Investering nummer 1: Autoklaven  Autoklaven är laboratoriets viktigaste detalj. Om du har en gammal tryckkokare, så släng den inte, men göm undan den och använd den bara i nödfall. En manuell autoklav på kokplatta har oftast för liten volym för att fungera på en mikrobiologikurs. Är den rymligare än 20 liter värms den så långsamt att du riskerar att agarn hydrolyseras under för långvarig upphettning. Den måste passas så att den inte kokar torrt, säkerhetsventilen måste läggas på efter viss uppvärmningstid och du måste stänga av plattan efter viss tid om du inte kopplat in en timer. Du blir låst till laboratoriet. Underligt nog känner de flesta biologilärare inte till att det finns moderna verktyg! Köp en bordsautoklav med programverk, en 20 liters frontmatad automatisk autoklav av samma typ som används på tandläkarmottagningar. I jämförelse med en antik gryta sparar den in 6-7 timmar i veckan av din arbetstid eller fritid. Tid som du hellre kan använda till APT-möten eller annat akut nödvändigt. Ladda autoklaven! Tryck på knappen! Gå ut och titta på fåglar! Autoklaven sköter sig själv! Har du ambitionen att alla elever på kursen ska jobba laborativt är en bra autoklav nödvändig! Starta apparaten på morgonen och medierna är färdiga till eftermidagens laboration. Du får en lämplig autoklav för omkring 25 000:-. Den har högsta prioritet!!!! Till priset av två datorer får du ett verktyg som är modernt så länge som liv är baserat på DNA och protein!! Autoklavens hållbarhet är möjligen något kortare än livet, men den överstiger datorernas livslängd. Och när inträffade det senast att en dator sparade 7 timmar i veckan av ditt liv? Tänk på att en autoklav med rund tryckkammare är svårare att packa effektivt än en med fyrkantig tryckkammare. Det är betydligt svårare att få plats med fyrkantiga provrörsställ i en rund autoklav.  Det finns en marknad för begagnad laboratorieutrustning. Om jag inte minns fel säljer landstingen begagnade autoklaver ibland.    Mikrougn I rummet behöver du vidare en mikrovågsugn för uppvärmning och smältning av agarmedier. Mikrougnen måste ha tillräcklig inre höjd för att rymma åtminstone en 500 kubikcentimeters flaska. Du kan inte värma en lutande flaska i en för låg ugn, då kokar det över obönhörligen. Observera att denna ugn inte får användas för matlagning i laboratoriet. Arbetsmiljölagen säger ifrån!   Investering nummer 2: sterilbänk eller sterilbox Sterilbänk med laminärt luftflöde är en tillgång för noggrannare sterilarbete. Det handlar om ett "omvänt dragskåp", som blåser sterilfiltrerad luft mot laboranten. Rätt använd blir infektionsfrekvensen i kulturerna mycket låg, vilket är viktigt vid hantering av stamkulturer. Dessvärre är sterilbänkar dyra, omkring 30 000:- för en liten bänk. I praktiken klarar man sig bra med en hemgjord sterilbox. Bilder: ã Caroline Adestam Detta är en låda med tak av plexiglas och luckor på fronten för händerna. Boxen kan gärna förses med UV-lysrör av samma typ som används i operationssalar, för att döda bakterier och småkryp som kvalster. Emellanåt torkas boxen ur med sprit. Största finessen är egentligen att det är dragfritt i sterilboxen. UV-rören kan du eventuellt utesluta. En sterilbox med UV-rör kan man tillverka på skolan för cirka 2000:- kronor. Gör den tillräckligt bred, minst 80 cm. Inre ytor bör utgöras av Perstorpsplatta. Man behöver dock 2,3 stycken sterilboxar för 30 elever. Man kan dock göra någon av dem lite enklare utan UV-belysning.  Sterilrum är ett billigt men proffsigt alternativ för cirka 7000:- kronor, om det finns en skrubb som kan offras för detta ändamål. Eluttag behövs i rummet. Ställ in en arbetsbänk av perstorpsplatta, montera armatur med UV-lysrör i taket och ställ in mekanisk luftrenare i rummet. Aggregaten filtrerar luften så att den blir dammfri och i praktiken steril. De är avsedda för astmatikers hem, vilket betyder tillverkning i ganska stora serier och därmed betydligt billigare än en sterilbänk. Om rummets volym är liten klarar du dig med ett litet aggregat. (Även om du inte är astmatiker har du för övrigt nytta av ett aggregat hemma. Med de nya arbetstidsavtalen har fritiden blivit allt knappare och aggregatet besparar dig en och annan dammsugning). Låt gärna in ett par rena överdragsrockar hänga i rummet. Starta agreggatet och tänd UV-belysningen ett par timmar innan någon ska arbeta i skrubben. Släck UV-ljuset när du vistas i rummet, så att du inte får cancer eller grå starr. Stäng av aggregatet när du jobbar, annars blir det för mycket luftcirkulation på det damm som finns i dina kläder. Man måste byta filterinsatsen emellanåt. Observera att det bör vara en mekanisk luftrenare. Elektrostatiska luftrenare får dammet att häfta vid rummets ytor, vilket du till varje pris vill undvika. Man ser ju inte gärna att dammet aktivt uppsöker odlingarna. En prisvärd mekanisk luftrenare med hög kapacitet tillverkas och säljs för cirka 4000:- kronor av Trelco AB i Vikmanshyttan.   (Köp inte "den globala luftrenaren" från http://www.anamra.se , men titta gärna på den och få dig ett gott skratt.)   Prylar Vågar, elektroniska med mätområde 0,00 -150 g. 3 000 kr/styck. En våg bör ständigt finnas vid medierna. OBS att vågar är stöldbegärliga för knarkhandel. Lås in eller förankra dem! Ympöglor av metall, ej nödvändigtvis av platina. Skaften är rätt dyra, 150:- kronor/styck hos Tamro (f.d. Labassco) http://www.tamromedlab.se . Köp till varje labbgrupp + några i reserv. Spritlampor om lokalen ej har gaslågor. C:a 200 kr per styck hos Tamro (f.d. Labassco). Gaslågor är bättre. Varje labbgrupp om 2 elever behöver en låga. Lampvekarna brinner slut om man inte fyller på spriten. Vekarna är förvånansvärt dyra. Lösa gasbrännare med engångsbehållare är inget dumt alternativ. Köp några gaständare också. Då slipper du tändstickor som skräpar ner. Karuseller för utspridning av droppar på agarplattor behövs det några stycken. Vi lät verkstadseleverna svarva rotorerna av stål och montera på ett tungt fundament. Måste lackas för att de inte ska rosta i sterilboxen.   Förbrukningsvaror Det går åt massor av tejp. Köp tunga rullhållare , 30 kr styck. Köp åtminstone 3 hållare till 15 elever, annars blir det köer. Stöldbegärliga eller har fötter. Parafilm som man klipper i 15 mm breda och 15 cm långa remsor är utmärkta att försluta med runt kanten av petriskålar med stamkulturer och särskilt viktiga odlingar. Plattorna torkar långsammare också. Och locken trillar inte av när man råkar stöta till skålarna. Plastpåsar 1 och 2 liters + påsförslutare. Vanliga för hushållsbruk. Att förpacka skålar med kulturer t ex. Etiketter av autoklaverbar typ. Avlägsnas före maskindiskning. Finns i pappershandeln. Ugnsfolie av aluminium att försluta kolvar och provrör med. OBS att frysfolie är oanvändbar här pga plastbeläggningen, som ej tål autoklavering eller ugn. Fina spritpennor för märkning av petriskålar. Fin spets är viktigt, ibland måste man skriva små protokoll på petriskålarnas kant. Välj t ex Pilots permanenta, xylen-fria svarta. De duger också att märka glasvaror med. Det är lättare att torka bort märkningen än att skrapa rester av etiketter från glasvaror. Jag låter varje elev kvittera ut en penna. De allra flesta återlämnas. Bomull . Ganska lite går åt till proppar i pipetter. Kärl bör hellre förslutas med Al-folie än med bomull.  Petriskålar går åt i massor. Stora skålar (90 mm) är billigare än små (45mm), men det går åt 8 ggr mer agar till de stora. Små agarplattor torkar för snabbt och bör ej användas för långa odlingar. Skålar med nabbar i locken får mindre imma på insidan. Skålar utan nabbar torkar långsammare. Beaktas kemikalie-kostnaden så är stora skålar aningen dyrare i drift och innebär mer arbete med tillredning av medier och belastar autoklaveringskapaciteten. Fler skålar kasseras av de små. .Räkna med ett snittpris på 2 kr per färdig agarplatta oavsett storlek.  Sterilfilter, engångs , porstorlek 0,2 m m. Dyra. För sterilisering av värmekänsliga lösningar i små kvantiteter. 50 filter kostar 650 kronor.  Injektionssprutor, 5 ml ,10 ml och ev större. C:a 2 kr styck på apoteket om du kan uppge en förtroendevärdig användning.. Stöldbegärliga. Köp inte kanyler. Sprutorna behövs till sterilfiltren. Dessutom är sprutorna praktiska till åtskilligt. De kan användas flera gånger.  Glasvaror Köp tillräckligt mycket!! Glasvaruåtgången är betydligt större än för kemilaborationer, eftersom ett odlingskärl kan bindas upp i många veckor för en del försök. Glasvaruåtgången är så stor att det är ekonomiskt rationellt att schemalägga kurser i parallellklasser i ordning efter varandra under läsåret. Dvs bara en klass i taget går mikrobiologikurs. Det är dessutom arbetskrävande att planera om parallella kurser efter tillgång på provrör!!  Odlingsrör , 16 mm diameter, raka utan krage. Odlingsrör kan ej värmas på gaslåga, då spricker dom. Rör med krage är nästan oanvändbara, eftersom man knappt kan återförsluta dem när de öppnats. Räkna med att det behövs minst 20 rör per elev under pågående kurs + rör till förberedelser och stamkulturer. Rören är rätt dyra, cirka 8 kronor styck på Kebo, möjligen billigare på Tamromedlab ( fd Labassco). Provrör med skruvlock är utomordentligt användbara om de tål autoklavering och centrifugering. Lämpliga för anaerob odling och tillväxtförsök. Har du en Hach-spektrofotometer och använder den kadmiumfria analysmetoden för nitratanalys kommer analysreagensen i sådana provrör. Spar rören. De passar som kyvetter i spektrofotometern och kan då användas för att mäta turbiditet vid tillväxtförsök. Kapsenberghuvar eller hättor behövs till odlingsrören. Av aluminium 9 kr/st. Plasthättor kostar 1-2 kr/styck och är lättare att diska, dvs bättre och billigare. I nödfall kan hättorna ersättas med förslutning av 3-dubbelt vikt Al-folie. Du behöver nästan lika många hättor som odlingsrör. Observera att hättorna inte är några täta lock. Vänd inte på rör med medier i. E-kolvar, 100 ml, vidhalsade. Massor går åt. Minst 3 st per elev och kurs. Välj enhetliga kolvar med volymskala på. Provrörsställ, lämpligen 3x5 för 16 mm rör. För coli-bestämning behöver du precis 15 rör i samma ställ. Ställen måste ha sådana yttermått att du kan packa rationellt i autoklaven. Lackerade, autoklaverbara ställ kostar c:a 50 kr. Minst 1 ställ per elev går åt. Köp minst 30 autoklaverbara provrörsställ per pågående kurs om 30 elever plus fler till specialarbeten och förråd med odlingar mm Autoklaverbara flaskor ,Duran eller Pyrex, 250 ml. Flaskorna måste vara försedda med plastring i mynningen så att man kan hälla utan att det rinner bredvid. Flaskorna från Schott säljs av Kebo för c:a 25 kronor.. Likvärda men billigare (?) finns på Tamro (f d Labassco). De är graderade med god precision, mätcylinder behövs normalt inte. Billiga flaskor, som spricker vid autoklavering eller som det inte går att hälla ur gör lärare och elever galna!! Större flaskor tar lång tid att värma, de svalnar långsammare och hela innehållet kanske inte förbrukas på en gång. Risken är då att innehållet infekterats. Stor omsättning på små flaskor är alltså att föredra. Köp minst 30 flaskor till att börja med. Kontrollera att flaskorna får plats i mikrougnen eller autoklaven!!! När du börjar få ett litet förråd av exklusivare medier behöver du fler flaskor. Pasteur-pipetter för engångsbruk, kan sköljas nödtorftigt och användas flera gånger. Om man med spritpenna ritar på gradering för 1 cm3 slipper man utgifter för dyrare, graderade pipetter, ca 100 kr för 250 stycken. Ställ en bägare med vatten på vågen, sug opp 1,00 g vatten, markera med spritpennan. Precisionen duger för många försök där man snarare ska uppskatta bakteriehaltens 10-potens. Mätpipetter, graderade, 10 ml. bör inköpas eftersom man vill ha steriliserade pipetter på lager i beredskap. 1 per elev räcker under kursen. Vogel-pipetter 10 ml och gärna 1, 2 och 5 ml är oumbärliga om du ska portionera lösningar i många provrör. T ex för coli-test. Alternativt tar du kolvpipetter. Mikropipetter med lösa "trynen" av polyeten är dyra och du klarar dig utan dem. Fast de är bra till genteknikförsök och när du ska späda till låga koncentrationer. 2-3 st glaskyvetter med lock och spår för objektglas. För Gramfärgning. Att ha aceton eller alkohol i. Kan till nöds ersättas med små bägare till varje grupp, men då ökar spritkonsumtionen. Sprutflaskor av plast, fylls med 70 % sprit. Märk "sprit". Bannlys vattenflaskor på labbet. Risk för förväxling. Destillerat vatten är en usel ersättning för sprit när man vill torka av arbetsplatsen. Att byta ut spriten mot vatten är kriminellt!! Motsatsen är på sin höjd lite dyr. Små plastkorgar för cirka 10 kronor styck. Finns hos Ö&B och andra varuhus. Låt varje labbgrupp kvittera en numrerad korg med ympögla, penna, verktygsställ, gummisug (napp) att ställa på bestämd plats. Systemet fungerar med obetydligt svinn. Kemikalier och odlings-medier Denaturerad alkohol 95%. Undvik Bitrex-denaturerad etanol. Smaken fastnar i huden och frigörs när man äter smörgås. Keton-denaturerad sprit duger bra. En klass förbrukar c:a 5 liter sprit på en 30 timmars kurs i mikrobiologi. Ansök eventuellt hos Läkemedelsverket om utökad tilldelning till skolan. Absolut alkohol behövs endast i pyttesmå kvantiteter till enstaka specialmedier för specialarbeten. Stjäl på kemi-inst! Odlingsmedier. Samtliga medier är hygroskopiska. Stäng alltid locken. Köp konsekvent av samma fabrikat, så att du kan kombinera medier efter recept. Oxoids medier är "billigare", de flesta preparaten kostar c:a 500 kr för 500 g, men pulvren dammar. Granulerade medier från Merck är lätthanterligare och dammar inte, men kostar det dubbla. Oxoids produkter säljs även av tillverkarens svenska dotterföretag, Agarpulver, 500 g av Kebos billigaste kvalitet duger bra. Ett måste. 300 kr. Nutrient broth, 500 g, 450 kr. Standardmedium för vätskekulturer. Nutrient agar, 500 g, 450 kr. Standardmedium som går åt för många enkla labbar. Nutrient broth + agarpulver är samma sak, men innebär en extra vägning. Malt extract agar, 500 g. 450kr. Standardmedium för odling av svampar. Köttextrakt, Lab-Lemco Powder, för tillblandning av många speciella medier. Ca 500 kr Jästextrakt 500 g, för tillblandning av många speciella medier. Trypton 500 g, aminosyrehydrolysat för speciella medier Pepton 500 g, aminosyrehydrolysat för speciella medier Bromkresolpurpur, indikator för att hitta t ex Escherichia coli. och mjölksyrabakterier natriumklorid, använd inte kemiinstitutionens kemikalier pga föroreningsrisk glukos, använd inte kemi-inst- kemikalier pga föroreningsrisk laktos, använd inte kemi-inst-kemikalier pga föroreningsrisk  för coli-test enligt rörmetoden behövs samtliga dessa fyra produkter från Oxoid eller motsvarande från andra tillverkare: Swedish Water Test Medium Nr 1. Swedish Water Test Medium Nr 2 Endo-agar base. Basiskt fuksin Enligt nyare standardbeskrivningar har man ändrat medierna något. Fråga försäljaren vad som gäller.   Eventuellt behöver du membranfilter och filteruppsatser för att bestämma antal coliforma bakterier med membranfiltermetoden. Säljs av Millipore.   Några adresser till leverantörer: Merck Eurolab (fd Kebo) http://www.merckeurolab.se (kemikalier, labbutrustning) Tamromedlab (fd Labassco) http://www.tamromedlab.se (kemikalier, utrustning) Ninolab AB http://www.ninolab.se utrustning, t ex multiomrörare, autoklaver Oxoid AB http://www.oxoid.se odlingsmedier, information med odlingsanvisningar Sjukhusservice AB http://www.sjukhusservice.se autoklaver Millipore http://www.millipore.com/offices.nsf/docs/personal membranfilter Trelco AB http://www.trelco.se mekaniska luftrenare       Jag har säkert glömt ett och annat. Tipsa mig gärna via e-mail till : lars.nyhlen@swipnet.se

Läromedel i mikrobiologi

Åter till Lasses startsida